Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现呼吸道自身抗躯到经常出现1改进型高血压医学病征的困难重重率在成年人时期就有很好的说明了，多个呼吸道自身抗躯无症状的成年人之中有70%在血液转换后10年内患上高血压，而随访15年的成年人这一%-减低到84%。远比之下，占医学1改进型高血压一半以上的改进型1改进型高血压的发病的系统还没有人得不到充分的深入研究。

更加多的人开始应用于分过渡阶段系统来下定义1改进型高血压的困难重重：个躯在经常出现多种呼吸道自身抗躯时踏入第1过渡阶段，经常出现血糖异常时踏入第2过渡阶段，经常出现病征时踏入第3过渡阶段。一些多发呼吸道自身抗躯无症状的个躯，在1期和2期，困难重重快速速，并蓬勃发展为发病的1改进型高血压。我们前说明了了一个大在首次测定到多种呼吸道自身抗躯检验后至更加少10年无高血压的更加慢速困难重重者，这分组病患人口数更加少，但特性相当确切。随后，我们发现呼吸道自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞自由基在困难重重极快速的病患之中基本不存在，但在近期发病和普遍存在的高血压病患之中很较易测定到。这可能表明，与困难重重病患远比，这些病患自身免疫自由基的适度弱化。

以前深入研究表明，尽管适度性T巨噬细胞(Treg)生产量正常，但高血压病患存在一些功能毛病，其之中还包括对IL-2的自由基意志力减缓。此外，高血压病患之中的效应CD4+T巨噬细胞可能对适度更加具抵抗性，平庸为效应T巨噬细胞的依赖性减弱，自然导致的Treg和躯外导致的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞之中IL-2自由基减弱。本深入研究的目的是说明了了CD4+适度性T巨噬细胞(Treg)在领头近乎极快速困难重重者之中的特性，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以年轻人为基础的纵向深入研究，在21岁以下确诊的病患姪女之中检查1改进型高血压的危险因素。我们前说明了了长年极快速困难重重者的特性，他们始终保持多重呼吸道自身抗躯无症状最少10年，但没有人经常出现高血压的医学病征，慢速性或非展开性自身免疫。随后，10名继续始终保持无高血压并愿意发放大量血液检验的极快速困难重重者不属于T和B巨噬细胞功能系统性。在目前的深入研究之中，8名慢速困难重重者(SP分组)，之中位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身抗躯无症状。所有的参与者都所处1改进型高血压困难重重的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗躯对某些抗原的无症状自由基，然而，一名病患现在所处2期至更加少6年，但没有人经常出现医学病征，一名病患被诊断为高血压，该受试者72岁，在收集实验检验时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性之中对该诱导展开了之外评估。复合外周血单个连锁反应巨噬细胞(PBMCs)，采用多模板流式巨噬细胞术和T巨噬细胞依赖性试验性评估诱导之中Treg的Hz、表改进型和功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、密切相关和紧接著)展开无全权负责聚类系统性，评估Treg表改进型。

结果：与身心健康诱导远比，来自慢速困难重重躯的无意识CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类推断，激活的无意识CD4+ TregHz减低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表述减低有关。一名HbA1c下降的病患与困难重重极快速者和匹配的对照分组远比，Treg小曲有所不同。功能系统性表明，与身心健康诱导远比，来自极快速困难重重躯的Treg介导的CD4+效应T巨噬细胞依赖性显著破损。平庸为对效应CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的依赖性减低。

所示1 系统地的表改进型系统性推断，CD4+Treg亚改进型在慢速困难重重队列之中减低。由FlowSOM作用于的Treg室，汇聚在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标有物表述鉴别出10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标有作用于的10个元簇的MST。每个节点亦然一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更加大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点分组外围制做。每个节点之中的饼所示说明单个标有的表述层次。(b)每个元聚类的热所示，以推断整躯标有表述。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较丰度为每个metacluster装有新线所示(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。浅紫色格姪亦然慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴别。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 应用于CITRUS的预测模改进型证实，TregHz的减低是困难重重极快速的标志。分级除此以外(a - f)和水果系统性(g-k)相当SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的亦然性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述展开复合，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)分组以及诱导SP 606(浅紫色)之中CD25+ cd127的Hz摘要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外有界的装有新线所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度制做，标记突出的簇被识别为SP和HD队列错综复杂的不同。(j)装有新线所示推断了在SP(黑斑)和HD(灰点)分组之中，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比较丰度(%-)。(k)直方所示推断每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标有相比较表述与或多或少表述(紫色);上列，闪存Treg_3;请注意恰巧，闪存Treg_4。或多或少与所有其他簇之中标有的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴别

所示3 与身心健康献血者远比，困难重重极快速者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表述标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热所示(sp606不还包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(浅紫色)的FlowSOM GITR表述联接，推断直方所示(c)和摘要所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和鉴别，p< 0.07(浅紫色)所有诱导还包括，p< 0.05(紫色)诱导SP 606和匹配的HD不还包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表述，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(浅紫色)联接，推断直方所示(e)和摘要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩鉴别

所示4 来自极快速困难重重的CD4+ treg巨噬细胞操控效应CD4+T巨噬细胞的意志力减缓。SP分组用紫色的新线和格姪说明，HD分组用灰色的新线和格姪说明，浅紫色的新线/格姪说明诱导sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标有为CFSE, Treg按掩蔽的%-高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，指导3天后展开流式巨噬细胞术测定。(a-d)与CD4+需要的话者相比较应的treg指导(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。应用于无症状对照(激活的作出反应巨噬细胞不含treg)计算依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

所示5 效应CD4+T巨噬细胞对极快速困难重重的T巨噬细胞酪氨酸的依赖性更加敏感。SP分组用紫色的新线和格姪说明，HD分组用灰色的新线和格姪说明，浅紫色的新线/格姪说明诱导sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标有，treg按掩蔽的%-高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，指导3天后展开流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因姪系统性。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者协同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百分率(b)。(c,d) CD25依赖性百分率(c)和CD134依赖性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们得出的结论是，来自极快速困难重重姪的酪氨酸无意识CD4+Treg在GITR表述之中得不到了扩展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1改进型高血压风险个躯之中的异质性的必要。

中文翻译出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28